Eenvoudige stappen voor het maken van natriumcitraatbuffer

Natriumcitraatbuffer wordt vaak gebruikt voor RNA-isolatie, omdat het de basishydrolyse van de RNA-strengen minimaliseert, waardoor het van onschatbare waarde is voor mRNA-zuivering tijdens genomisch onderzoek en voor het bestuderen van transcriptie. Op citraat gebaseerde buffers helpen ook bij het opsporen van antigenen in gefixeerde weefselpreparaten, omdat ze de kruisverbindingen tussen de antigenen en de fixatiemedia verbreken.

Met de volgende eenvoudige stappen kan men in minder dan 10 minuten een natriumcitraatbuffer met een pH van 6 (zuur) maken.

Er zijn maar weinig materialen nodig om de natriumcitraatbuffer te maken. Met citroenzuur heeft men slechts 1 M natriumhydroxide, gedestilleerd water en een gekalibreerde pH-sonde nodig. Natriumcitraat is optioneel.

Voor het maken van de buffer zijn ook een maatcilinder van 1 liter, een maatkolf van 1 liter en drie mediaflessen van 1 liter nodig. Ten slotte heb je een magnetische roerstaaf en een magnetische roerder nodig. Al deze materialen zijn te vinden op school,

Er zijn twee methoden om natriumcitraatbuffers te maken, afhankelijk van de materialen die voor u toegankelijk zijn.

1. Als je zowel citroenzuur als de geconjugeerde basis hebt, maak dan van elk een voorraadoplossing door 21 gram te mengen citroenzuur in 1 liter gedestilleerd water en 29,4 gram natriumcitraat in 1 liter gedestilleerd water.
2. Als je alleen citroenzuur bij de hand hebt, meng dan 2,1 gram in iets minder dan 1 liter gedestilleerd water.

Meng 82 milliliter citroenzuuroplossing met 18 milliliter natriumcitraatoplossing. Voeg hieraan voldoende gedestilleerd water toe om het volume van het mengsel op iets minder dan 1 liter te brengen.

Terwijl u de oplossing voorzichtig roert met een magnetische roerder, gebruikt u 1 M natriumhydroxide om de pH van het mengsel in te stellen op 6,0. Voeg vervolgens met een maatkolf meer gedestilleerd water toe om het uiteindelijke totale volume van de oplossing op precies 1 te brengen liter.