Restrictiefragmentlengte-polymorfisme (RFLP) is een moleculaire methode van genetische analyse waarmee individuen kunnen worden geïdentificeerd op basis van unieke patronen van restrictie-enzym snijden in specifieke gebieden van DNA.
Ook wel RFLP-analyse genoemd, maakt de techniek gebruik van de polymorfismen in de genetische codes van individuele mensen. Hoewel alle leden van een soort in wezen dezelfde genetische samenstelling hebben, verklaren deze kleine verschillen variaties in fenotype, zoals uiterlijk of metabolisme, tussen individuen.
RFLP-analysetechniek
RFLP-analysetechniek omvat het snijden van een bepaald gebied van DNA met bekende variabiliteit, met restrictie-enzymen, het vervolgens scheiden van de DNA-fragmenten door agarosegel-elektroforese en het bepalen van het aantal fragmenten en relatieve afmetingen.
Een restrictie-enzym is een enzym, een eiwitmolecuul, dat DNA op restrictieplaatsen snijdt. In wezen wordt het DNA-monster afgebroken en verteerd door de restrictie-enzymen. De resulterende fragmenten worden gescheiden op basis van hun lengte en het patroon van fragmentgroottes zal voor elk getest individu verschillen.
Het volledige RFLP-proces vereist sonde-etikettering, DNA-fragmentatie, elektroforese, blotting, hybridisatie, wassen en autoradiografie. De gedetecteerde RFLP wordt gevisualiseerd met behulp van röntgenfilm in autoradiografie, waar DNA-fragmenten kunnen worden bekeken en geanalyseerd nadat ze van elkaar zijn gescheiden door elektroforese.
Aanvraag voor RFLP-gebruik
Enkele van de toepassingen voor RFLP-analyse zijn:
- DNA-vingerafdrukken: Forensische wetenschappers kunnen RFLP-analyse gebruiken om verdachten te identificeren op basis van bewijsmonsters die zijn verzameld op plaats delicten.
- Vaderschap: RFLP wordt ook gebruikt bij het bepalen van vaderschap of voor het traceren van afkomst.
- Genetische diversiteit: De techniek kan worden gebruikt bij het bestuderen van evolutie en migratie van dieren in het wild, het bestuderen van fokpatronen bij dierenpopulaties en het opsporen en diagnosticeren van bepaalde ziekten.
De techniek van het gebruik van RFLP-detectie van variatie in genomen is een essentieel hulpmiddel bij het in kaart brengen van het genoom en de analyse van genetische ziekten. Als de locatie van een bepaald ziektegen wordt gezocht in een bepaald chromosoom, dan zouden onderzoekers dat doen analyseer het DNA van leden van een familie met de ziekte en zoek vervolgens naar vergelijkbare overervingspatronen in RFLP allelen.
Zodra een ziektegen is gelokaliseerd, kan het uitvoeren van RFLP-analyse op andere familieleden een drager van de mutante genen onthullen of een algemeen ziekterisico signaleren. Het is belangrijk op te merken dat de RFLP-techniek niet veel wordt gebruikt nu nieuwere, robuustere technieken worden gebruikt voor DNA-analyse in de forensische wetenschap en op verschillende andere gebieden.
Negatieve aspecten van RFLP
Helaas is de RFLP-analysetechniek vervelend en traag. Afgezien van het vereisen van een grote hoeveelheid monster-DNA, zou het monster gewoonlijk ongeveer de grootte van een kwart moeten hebben, dat wil zeggen relatief groot voor DNA-monsters - het proces, van sonde-etikettering tot wassen en autoradiografie, kan tot een volledige maand in beslag nemen compleet.
Resultaten van het Human Genome Project hebben de behoefte aan RFLP vrijwel vervangen. Het project maakte het mogelijk om de volledige sequentie van het DNA in menselijke cellen, het menselijk genoom, te bepalen en om alle genen in het menselijke genoom te identificeren.