10X TBE elektroforesebufferprotocol of recept

click fraud protection

TBE en TAE worden voornamelijk als buffer gebruikt in de moleculaire biologie elektroforese van nucleïnezuren. Tris-buffers worden gebruikt onder enigszins basale pH-omstandigheden, zoals voor DNA-elektroforese, omdat dit het DNA behoudt oplosbaar in de oplossing en gedeprotoneerd zodat het zal worden aangetrokken door de positieve elektrode en zal migreren door een gel. EDTA is een ingrediënt in de oplossing omdat dit vaak voorkomt chelaatvormer beschermt nucleïnezuren tegen afbraak door enzymen. De EDTA cheleert tweewaardige kationen die cofactoren zijn voor nucleasen die het monster kunnen besmetten. Aangezien het magnesiumkation echter een cofactor is voor DNA-polymerase en restrictie-enzymen, wordt de concentratie van EDTA met opzet laag gehouden (ongeveer 1 mM-concentratie).

U hoeft de oplossing niet te steriliseren. Hoewel er na verloop van tijd neerslag kan optreden, is de voorraadoplossing nog steeds bruikbaar. U kunt de pH aanpassen met een pH-meter en druppelsgewijs geconcentreerd toevoegen

instagram viewer
zoutzuur (HCl). Het is prima om TBE-buffer bij kamertemperatuur op te slaan, hoewel u de voorraadoplossing misschien wilt filteren door een filter van 0,22 micron om deeltjes te verwijderen die neerslag zouden bevorderen.

Als u per ongeluk een 5X- of 10X-voorraadoplossing gebruikt, krijgt u slechte resultaten omdat er zoveel warmte wordt gegenereerd. Naast een slechte resolutie, kan het monster beschadigd raken.

Hoewel TBE en TAE veelvoorkomende elektroforesebuffers zijn, zijn er wel andere opties voor geleidende oplossingen met een lage molariteit, inclusief lithiumboraatbuffer en natriumboraatbuffer. Het probleem met TBE en TAE is dat op Tris gebaseerde buffers het elektrische veld beperken dat kan worden gebruikt bij elektroforese omdat te veel lading een op hol geslagen temperatuur veroorzaakt.

instagram story viewer