PBS of fosfaat gebufferd zout is een bufferoplossing dat is bijzonder waardevol omdat het de ionenconcentratie, osmolariteit en pH van lichaamsvloeistoffen nabootst. Met andere woorden, het is isotoon voor menselijke oplossingen, dus het is minder waarschijnlijk dat het celbeschadiging, toxiciteit of ongewenste neerslag veroorzaakt in biologisch, medisch of biochemisch onderzoek.
PBS Chemische samenstelling
Er zijn verschillende recepten om de PBS-oplossing te bereiden. De essentiële oplossing bevat water, natriumwaterstoffosfaat en natriumchloride. Sommige preparaten bevatten kaliumchloride en kaliumdiwaterstoffosfaat. EDTA kan ook worden toegevoegd aan cellulaire bereiding om klontering te voorkomen.
Met fosfaat gebufferde zoutoplossing is niet ideaal voor gebruik in oplossingen die bevatten tweewaardige kationen (Fe2+, Zn2+) omdat er neerslag kan optreden. Sommige PBS-oplossingen bevatten echter calcium of magnesium. Houd er ook rekening mee dat fosfaat enzymatische reacties kan remmen. Wees je vooral bewust van dit potentiële nadeel bij het werken met DNA. Hoewel PBS uitstekend geschikt is voor fysiologische wetenschap, moet u er rekening mee houden dat het fosfaat in een met PBS gebufferd monster kan neerslaan als het monster wordt gemengd met ethanol.
Een typische chemische samenstelling van 1X PBS heeft een eindconcentratie van 10 mM PO43−, 137 mM NaCl en 2,7 mM KCl. Hier is de uiteindelijke concentratie van reagentia in de oplossing:
| Zout | Concentratie (mmol / L) | Concentratie (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| Na2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Protocol voor het maken van fosfaatgebufferde zoutoplossing
Afhankelijk van uw doel, kunt u 1X, 5X of 10X PBS voorbereiden. Veel mensen kopen gewoon PBS-buffertabletten, lossen ze op in gedestilleerd water en passen de pH naar behoefte aan met zoutzuur of natriumhydroxide. Het is echter gemakkelijk om de oplossing helemaal opnieuw te maken. Hier zijn recepten voor 1X en 10X fosfaatgebufferde zoutoplossing:
Reagens |
Bedrag toevoegen (1 ×) |
Eindconcentratie (1 ×) |
Bedrag toe te voegen (10 ×) |
Eindconcentratie (10 ×) |
| NaCl | 8 g |
137 mM | 80 g |
1,37 M |
| KCl | 0,2 g |
2,7 mM | 2 g |
27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g |
10 mM | 14,4 g |
100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g |
1,8 mM | 2,4 g |
18 mM |
Optioneel: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g |
1 mM | 1,33 g |
10 mM |
MgCl2 • 6H2O |
0,10 g | 0,5 mM |
1,0 g | 5 mM |
- Los de reagenszouten op in 800 ml gedestilleerd water.
- Stel de pH met zoutzuur in op het gewenste niveau. Meestal is dit 7,4 of 7,2. Gebruik een pH-meter om de pH te meten, geen pH-papier of een andere onnauwkeurige techniek.
- Voeg gedestilleerd water toe tot een eindvolume van 1 liter.
Sterilisatie en opslag van PBS-oplossing
Sterilisatie is voor sommige toepassingen niet nodig, maar als u het steriliseert, verdeel de oplossing dan in aliquots en autoclaaf gedurende 20 minuten bij 15 psi (1,05 kg / cm2) of gebruik filtersterilisatie.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing kan zijn opgeslagen bij kamertemperatuur. Het kan ook worden gekoeld, maar een 5X- en 10X-oplossing neerslaan wanneer afgekoeld. Als u een geconcentreerde oplossing moet koelen, bewaar deze dan eerst bij kamertemperatuur totdat u zeker weet dat de zouten volledig zijn opgelost. Als er toch neerslag optreedt, brengt het opwarmen van de temperatuur ze weer in oplossing. Houdbaarheid van gekoelde oplossing is 1 maand.
Een 10X-oplossing verdunnen om 1X PBS te maken
10X is een geconcentreerde oplossing of stockoplossing, die kan worden verdund om een 1X of normale oplossing te maken. Een 5X-oplossing moet 5 keer worden verdund om een normale verdunning te verkrijgen, terwijl een 10X-oplossing 10 keer moet worden verdund.
Om een werkoplossing van 1 liter van 1X PBS te bereiden uit een 10X PBS-oplossing, voegt u 100 ml van de 10X-oplossing toe aan 900 ml water. Dit verandert alleen de concentratie van de oplossing, niet de gram of molaire hoeveelheid van de reagentia. De pH mag niet worden beïnvloed.
PBS versus DPBS
Een andere populaire bufferoplossing is Dulbecco's met fosfaat gebufferde zoutoplossing of DPBS. DPBS wordt, net als PBS, gebruikt voor biologisch onderzoek en buffers in het pH-bereik van 7,2 tot 7,6. Het kan bij kamertemperatuur worden bewaard. De oplossing van Dulbecco bevat een lagere concentratie fosfaat. Het is 8,1 mM mM fosfaationen, terwijl gewone PBS 10 mM fosfaat is. Het recept voor 1x DPBS is:
| Reagens | Bedrag toe te voegen (1x) |
| NaCl | 8.007 g |
| KCl | 0.201 g |
| Na2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0.200 g |
| Optioneel: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
Los de zouten op in 800 ml water. Pas de pH aan op 7,2 tot 76 met zoutzuur. Pas het uiteindelijke volume aan tot 1000 ml met water. Autoclaaf bij 121 ° C gedurende 20 minuten.
Bronnen
- Dulbecco, R.; et al. (1954). "Plaquevorming en isolatie van zuivere lijnen met poliomyelitis-virussen". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
- "Met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.