Gids voor het maken van een eenvoudige fosfaatbuffer

In de chemie, een bufferoplossing dient om een ​​stabiele pH te behouden wanneer een kleine hoeveelheid zuur of base in een oplossing wordt gebracht. Een fosfaatbufferoplossing is vooral nuttig voor biologische toepassingen, die bijzonder gevoelig zijn voor pH-veranderingen, aangezien het mogelijk is om een ​​oplossing te bereiden in de buurt van drie pH-niveaus.

De drie pKa-waarden voor fosforzuur (uit de CRC Handbook of Chemistry and Physics) zijn 2.16, 7.21 en 12.32. Mononatriumfosfaat en zijn geconjugeerde base, dinatriumfosfaat, worden meestal gebruikt om buffers met pH-waarden rond 7 te genereren, voor biologische toepassingen, zoals hier getoond.

• Notitie: Onthoud dat pKa niet gemakkelijk tot een exacte waarde kan worden gemeten. Er kunnen in de literatuur iets verschillende waarden beschikbaar zijn uit verschillende bronnen.

Het maken van deze buffer is iets gecompliceerder dan het maken van TAE- en TBE-buffers, maar het proces is niet moeilijk en duurt slechts ongeveer 10 minuten.

Om je fosfaatbuffer te maken, heb je de volgende materialen nodig:

• Mononatriumfosfaat
• Dinatriumfosfaat.
• Fosforzuur of natriumhydroxide (NaOH)
• pH-meter en sonde
• Maatkolf
• Maatcilinders
• Bekers
• Roer bars
• Roerplaat

Voordat u een buffer maakt, moet u eerst weten welke molariteit u wilt, welk volume u moet maken en wat de gewenste pH is. De meeste buffers werken het beste bij concentraties tussen 0,1 M en 10 M. De pH moet binnen 1 pH-eenheid van de zuur / geconjugeerde base pKa liggen. Voor de eenvoud creëert deze voorbeeldberekening 1 liter buffer.

Gebruik de Henderson-Hasselbalch (HH) -vergelijking (hieronder) om te bepalen welke verhouding van zuur tot base nodig is om een ​​buffer met de gewenste pH te maken. Gebruik de pKa-waarde die het dichtst bij uw gewenste pH ligt; de verhouding verwijst naar het zuur-base geconjugeerde paar dat overeenkomt met die pKa.

HH-vergelijking: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])

Voor een buffer met pH 6,9 is [Base] / [Acid] = 0,4898

Vervanging voor [zuur] en oplossen voor [base]

De gewenste molariteit van de buffer is de som van [zuur] + [base].

Voor een 1 M buffer, [Base] + [Acid] = 1 en [Base] = 1 - [Acid]

Door dit in de verhoudingsvergelijking te vervangen, krijg je vanaf stap 2:

[Zuur] = 0,6712 mol / l

Oplossen voor [zuur]

Met behulp van de vergelijking: [Base] = 1 - [Acid], kun je dat berekenen:

[Basis] = 0,3288 mol / l

Nadat je de hebt gebruikt Henderson-Hasselbalch vergelijking om de verhouding van zuur tot base te berekenen die nodig is voor uw buffer, bereidt u iets minder dan 1 liter oplossing voor met de juiste hoeveelheden mononatriumfosfaat en dinatriumfosfaat.

Gebruik een pH-sonde om te bevestigen dat de juiste pH voor de buffer is bereikt. Pas indien nodig lichtjes aan met fosforzuur of natriumhydroxide (NaOH).

Zodra de gewenste pH is bereikt, brengt u het volume van de buffer op 1 liter. Verdun vervolgens de buffer naar wens. Dezezelfde buffer kan worden verdund om buffers van 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M of iets daartussenin te creëren.

Hier zijn twee voorbeelden van hoe een fosfaatbuffer kan worden berekend, zoals beschreven door Clive Dennison, afdeling Biochemie aan de Universiteit van Natal, Zuid-Afrika.

De vereiste is een 0,1 M Na-fosfaatbuffer, pH 7,6.

In de Henderson-Hasselbalch-vergelijking is pH = pKa + log ([zout] / [zuur]), het zout is Na2HPO4 en het zuur is NaHzPO4. Een buffer is het meest effectief op zijn pKa, dat is het punt waar [zout] = [zuur]. Uit de vergelijking is duidelijk dat als het [zout]> [zuur], de pH hoger zal zijn dan de pKa, en als [zout]

NaH2PO4 + NaOH - + Na2HPO4 + H20.

Als de oplossing eenmaal op de juiste pH is getitreerd, kan deze worden verdund (tenminste over een kleine) bereik, zodat de afwijking van ideaal gedrag klein is) tot het volume dat het gewenste zal opleveren molariteit. De HH-vergelijking stelt dat de verhouding van zout tot zuur, in plaats van hun absolute concentraties, de pH bepaalt. Let daar op:

• Bij deze reactie is het enige bijproduct water.
• De molariteit van de buffer wordt bepaald door de massa van het afgewogen zuur NaH2PO4 en het uiteindelijke volume waaruit de oplossing is opgebouwd. (Voor dit voorbeeld zou 15,60 g dihydraat per liter eindoplossing nodig zijn.)
• De concentratie van de NaOH is niet van belang, dus elke willekeurige concentratie kan worden gebruikt. Het moet natuurlijk voldoende geconcentreerd zijn om de vereiste pH-verandering in het beschikbare volume te bewerkstelligen.
• De reactie houdt in dat er slechts een eenvoudige berekening van de molariteit en een enkele weging nodig is: slechts één oplossing moet worden verzonnen en al het afgewogen materiaal wordt gebruikt in de buffer - dat wil zeggen, er is geen verspilling.

Merk op dat het in eerste instantie niet juist is om het "zout" (Na2HPO4) af te wegen, omdat dit een ongewenst bijproduct geeft. Als er een oplossing van het zout wordt gemaakt, zal de pH hoger zijn dan de pKa en zal titratie met een zuur nodig zijn om de pH te verlagen. Als HC1 wordt gebruikt, is de reactie:

Na2HPO4 + HC1 - + NaH2PO4 + NaC1,

wat NaC1 oplevert, met een onbepaalde concentratie, wat niet gewenst is in de buffer. Soms - bijvoorbeeld bij een ionenuitwisseling ionensterkte gradiëntelutie - is het nodig om een ​​gradiënt van bijvoorbeeld [NaCl] op de buffer te hebben. Er zijn dan twee buffers nodig voor de twee kamers van de gradiëntgenerator: de startbuffer (dat wil zeggen de evenwichtsbuffer, zonder toegevoegde NaC1 of met de startconcentratie NaC1) en de afwerkingsbuffer, die hetzelfde is als de startbuffer, maar die bovendien de afwerkingsconcentratie NaC1 bevat. Bij het maken van de afwerkbuffer moet rekening worden gehouden met de gebruikelijke ioneneffecten (vanwege het natriumion).

Voorbeeld zoals opgemerkt in het tijdschrift Biochemical Education16(4), 1988.

De vereiste is een ionische sterkte gradiëntafwerkingsbuffer, 0,1 M Na-fosfaatbuffer, pH 7,6, die 1,0 M NaCl bevat.

In dit geval wordt de NaC1 afgewogen en samen met de NaHEPO4 samengesteld; bij de titratie wordt rekening gehouden met veelvoorkomende ioneneffecten, waardoor complexe berekeningen worden vermeden. Voor 1 liter buffer worden NaH2PO4.2H20 (15,60 g) en NaC1 (58,44 g) opgelost in ongeveer 950 ml gedestilleerd H20, getitreerd tot pH 7,6 met een tamelijk geconcentreerde NaOH-oplossing (maar met een willekeurige concentratie) en aangevuld tot 1 liter.

Voorbeeld zoals opgemerkt in het tijdschrift Biochemical Education16(4), 1988.